Bioquímica y Bioquímica Analítica

Abstracto

Un nuevo polímero con impronta molecular para la eliminación selectiva de hemoglobina interferente antes del análisis de sangre completa

Tumelo Hendrick Tabane y Bareki Shima Batlokwa

La hemoglobina, una proteína globular roja pesada y responsable de la pigmentación roja de la sangre entera, a menudo interfiere en la identificación y cuantificación de biomarcadores asociados a enfermedades en la sangre entera, en el campo del diagnóstico molecular. El principal desafío es la introducción directa de sangre entera como muestra en los instrumentos de análisis debido a su complejidad fisiológica y su naturaleza "sucia". Por ejemplo, el pigmento rojo de la sangre entera, que se caracteriza como "suciedad", generalmente coeluye con los biomarcadores y los enmascara para que no se puedan separar cromatográficamente antes de su detección final. También obstruye los componentes del instrumento, como las columnas de separación que se sabe que son sensibles, lo que conduce a resultados imprecisos e inexactos durante el bioensayo. Para abordar estos desafíos, nuestro laboratorio sintetizó un polímero impreso con hemoglobina novedoso, selectivo, efectivo y robusto, en forma de polvo, a través de polimerización masiva por radicales libres empleando tecnología de impresión molecular, para eliminar selectivamente la hemoglobina que interfiere de las muestras de sangre entera antes del análisis instrumental de biomarcadores asociados a enfermedades. A partir de los resultados, el polvo de polímero eliminó eficazmente la hemoglobina de la muestra de sangre completa, como lo demuestra la reducción de la absorbancia ultravioleta-visible de tan alto como 0,794 Au a valores más bajos de 0,193 Au antes y después de la aplicación del polvo de polímero, respectivamente. Experimentalmente, el polvo tuvo una alta capacidad de unión hacia la hemoglobina objetivo, como lo demuestra el alto porcentaje de eficiencia de eliminación del 76% de las soluciones estándar de hemoglobina, en comparación con su baja capacidad de unión hacia una especie análoga (clorofila), al 32% de las soluciones estándar de clorofila. Además, el polvo de polímero demostró ser robusto, ya que eliminó la interferencia de hemoglobina de la matriz compleja "sucia" de muestras de sangre completa humana real hasta en un 74% de eliminación de hemoglobina, que fue comparable al 76% de eliminación de hemoglobina de estándares puros, por lo tanto, el polvo de polímero demostró que puede funcionar de manera eficaz en diversos entornos de matriz limpia y sucia. Además, el polvo de polímero se presentó como una herramienta preanalítica de limpieza de sangre completa eficiente, selectiva y no destructiva que, con más investigaciones, puede reemplazar las estrategias de limpieza de sangre completa convencionales, destructivas y no selectivas, como la centrifugación comúnmente empleada.