Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Un método simple y eficiente para extraer ADN de S. rolfsii para estudios de diversidad basados ​​en PCR

AS masculino, Kato F y Mukankusi CM

Los métodos actuales de extracción de ADN de Sclerotium rolfsii utilizan una gran cantidad de productos químicos orgánicos peligrosos para extraer ADN de alta calidad. La extracción del ADN se complica aún más por los exopolisacáridos que se unen al ADN y lo vuelven mucilaginoso. Desarrollamos un protocolo simple y eficiente para extraer ADN de alta calidad de S. rolfsii. Nuestro método utiliza un tampón de extracción de ADN que contiene dodecil sulfato de sodio y proteinasa K para inactivar las proteínas y una alta concentración de sal para precipitar los exopolisacáridos. No utiliza fenol, cloroformo ni alcohol isoamílico durante el proceso de extracción de ADN. Tampoco requiere liofilización de los micelios ni molienda con nitrógeno líquido. Utilizando nuestro método, se obtuvo una cantidad suficiente de ADN puro (media A260: A280=1,91 ± 0,001) (media = 55,57 ± 0,002 ng/µl) a partir de 100 mg de micelio. El ADN se amplificó mediante PCR utilizando cebadores de repetición de secuencias simples y cebadores dirigidos a la región espaciadora transcrita interna de S. rolfsii. Nuestro método será muy útil en laboratorios que no tienen acceso a nitrógeno líquido ni a instalaciones de secado por congelación y será un catalizador para estudios filogenéticos basados ​​en PCR de este importante patógeno del frijol común.