Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Tira de prueba anti-LPS para la detección de alimentos contaminados con Salmonella y E. coli

Alvin Wang, Gabriel Molina, Víctor Prima y Kevin KW Wang

Las enterobacterias como E. coli y Salmonella liberan una endotoxina, o lipopolisacárido (LPS), que contribuye a los síntomas de intoxicación alimentaria. Planteamos la hipótesis de que el LPS podría detectarse mediante una simple tira de prueba, detectando así la presencia de enterobacterias en los alimentos. Aquí describimos el desarrollo de una novedosa tira de prueba de detección anti-LPS. Se expusieron tiras de prueba de poliestireno flexible con una membrana absorbente de poli(fluoruro de vinilideno) adherida a un extremo a varias diluciones de alimentos o fuentes bacterianas. A esto le siguió la incubación secuencial con un anticuerpo anti-LPS primario, un anticuerpo secundario biotinilado y una enzima fosfatasa alcalina ligada a estreptavidina. Luego, la tira de prueba se reveló con el sustrato fosfato de 5-bromo-4-cloro-3-indolilo/nitroazul de tetrazolio. Por lo tanto, la presencia de un producto precipitado púrpura indicaría la presencia de LPS y enterobacterias. La intensidad u oscuridad del color se cuantificó densitométricamente y se comparó con la curva estándar de LPS. Se demostró que el ensayo de tira de prueba detecta fácilmente tan solo 25 ng/mL de LPS purificado. Además, el ensayo de tira de prueba anti-LPS puede detectar y cuantificar con sensibilidad el LPS liberado por E. coli viva en medios de cultivo. Finalmente, tres grupos de alimentos (rodajas de fresa, hojas de espinaca y carne molida) se inocularon con E. coli durante dos puntos de tiempo a temperatura ambiente y luego el agua de enjuague de cada preparación de alimentos se sometió al ensayo de tira de prueba anti-LPS. Para los tres grupos de alimentos, el ensayo de tira de prueba puede detectar y cuantificar fácilmente la contaminación bacteriana tanto de 8 h como de 24 h sobre sus respectivos controles no contaminados. En conclusión, se desarrolló un prototipo simple de prueba de tira anti-LPS para detectar fácilmente la contaminación por enterobacterias de alimentos comunes.