Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa mediante inmunocaptura colorimétrica para la detección rápida del virus Y de la papa

Mohammad Amin Almasi y Seyedmohammad Hosseyni Dehabadi

El ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) es una técnica novedosa para amplificar ADN a temperatura constante, con alta especificidad, sensibilidad, rapidez y eficiencia. Para reducir al mínimo el tiempo requerido para algunos ensayos de diagnóstico, incluyendo PCR con transcripción inversa (RT-PCR), amplificación isotérmica mediada por bucle con transcripción inversa (RT-LAMP) y también DAS-ELISA, se utilizó y optimizó un protocolo colorimétrico innovador IC-RT-LAMP e IC-RT-PCR basado en el genoma del virus de la patata Y (PVY). En primer lugar, se realizó el ensayo DAS-ELISA para detectar el virus en una colección que contenía 95 muestras sospechosas. Por último, se detectaron cinco muestras como muestras positivas. Luego, las muestras positivas se verificaron mediante métodos moleculares. En este sentido, se seleccionaron los cuatro cebadores RT-LAMP (es decir, F3, B3, FIP y BIP) junto con los cebadores RT-PCR (F y B) sobre la base del gen de la proteína de la cubierta (CP) del genoma PVY. Aunque los ensayos DAS-ELISA, RT-PCR y RT-LAMP pudieron detectar con éxito muestras de plantas infectadas positivas, considerando el tiempo, la seguridad, la sensibilidad, el costo y la simplicidad, el último fue en general superior. Además, los resultados demostraron que el ensayo RT-LAMP fue 100 veces más sensible y 3 veces más rápido en comparación con RT-PCR. El ensayo LAMP se realizó en el baño de agua, ya sea libre de cualquier máquina de termociclador o instalaciones de laboratorio sofisticadas. Mientras tanto, entre los seis colorantes visuales diferentes para detectar con precisión los productos IC-RT-LAMP, Hydroxynaphthol blue, GeneFinder ^TM y SYBR Green I pudieron producir un cambio de color y brillo estables y prolongados en un enfoque basado en tubos cerrados para prevenir el riesgo de contaminación cruzada, concluyendo finalmente como los mejores. En consecuencia, proponemos este ensayo colorimétrico como un sistema de reconocimiento viral alternativo altamente confiable con respecto al reconocimiento de PVY y probablemente otras enfermedades de base viral.