Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

La expresión constitutiva de GFP-UTF1 interfiere con la diferenciación de células ES y EC

Rajkumar P. Thummer, Loes J. Drenth-Diephuis y Bart JL Eggen

Las células madre embrionarias tienen la capacidad de autorenovarse y pueden diferenciarse en todos los tipos de células de los tres linajes germinales embrionarios. El gen del factor de transcripción 1 de células embrionarias indiferenciadas (UTF1) se expresa en gran medida en las células madre embrionarias y anteriormente informamos que UTF1 está estrechamente asociado con la cromatina y es necesario para la diferenciación de células madre embrionarias (ES) y carcinoma embrionario (EC) de ratón pluripotentes . En este estudio, generamos líneas de células ES y EC que expresan constitutivamente GFP-UTF1 para investigar más a fondo su papel en la diferenciación. Las células ES y EC que expresan constitutivamente GFP-UTF1 sufrieron una supresión en su proliferación y aún dependían de LIF para la autorrenovación. La diferenciación del cuerpo embrionario (EB) de las células madre embrionarias que sobreexpresan GFP-UTF1 mostró tanto una diferenciación normal como una diferenciación retrasada o incompleta de un subconjunto de células. La expresión de GFP-UTF1 se mantuvo en forma persistente en células indiferenciadas, mientras que no se detectó en células diferenciadas. En los casos en que las células madre embrionarias que expresaban GFP-UTF1 se diferenciaban normalmente en respuesta al DMSO, la diferenciación de las células madre embrionarias se bloqueaba por completo. Cuando las células madre embrionarias y embrionarias que expresaban GFP-UTF1 se trataron con AR, se indujeron marcadores de diferenciación y los niveles de proteína endógena UTF1 y GFP-UTF1 disminuyeron. Sin embargo, se siguió detectando ARNm de GFP-UTF1 y UTF1 (en células madre embrionarias), lo que indica que la degradación de la proteína (GFP-)UTF1 precedió a la regulación negativa del ARNm de (GFP-) UTF1, lo que sugiere que el AR indujo la degradación de UTF1. Resumiendo, estos datos indican que, de manera similar a la depleción de UTF1, la sobreexpresión de GFP-UTF1 interfirió en la diferenciación de las células madre embrionarias y embrionarias.