Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

La criopreservación afecta la funcionalidad celular de las células madre derivadas de tejido adiposo expandidas a largo plazo

Ali El Othmani, Sabrina Rouam, Anass Abbad, Chaimaa Erraoui, Sara Harriba, Hassan Boukind, Jalal Nourlil, Gabriel Malka y Loubna Mazini

Objetivo: Las células madre derivadas de tejido adiposo (ADSC) son células menos inmunogénicas y tienen un perfil de secreción de citocinas heterogéneo, lo que las convierte en mejores candidatas para la inmunoterapia celular. Incluso de forma innata o estimulada, la interleucina-6 (IL-6) y el receptor tipo Toll 2 (TLR2) secretados por las ADSC se modularon y dieron lugar a diferentes vías de mecanismos inflamatorios a través de la secreción de diferentes factores inflamatorios. Estas propiedades pueden ser muy útiles en el tratamiento de enfermedades crónicas asociadas a la inflamación. Para su uso, la expansión ex vivo de las ADSC es un tema crítico antes del trasplante o la criopreservación. Se ha informado de que los cambios celulares funcionales durante la expansión del cultivo son susceptibles de interactuar con los efectos de congelación/descongelación, lo que genera dudas sobre los resultados terapéuticos celulares. El objetivo de este estudio es identificar el efecto de la congelación/descongelación en los diferentes puntos temporales del cultivo de expansión sobre la secreción de IL-6 y TLR2.
Métodos: Se recogieron ADSC de donantes jóvenes, se expandieron en cultivo y se criopreservaron en suero bovino fetal (FBS) y dimetilsulfóxido (DMSO) después de cada pase durante 6 meses a un año. Luego se analizó la proliferación, clonogenicidad, expresión génica de citocinas y evaluación de las ADSC antes de la criopreservación (frescas) y después de la descongelación y se cultivaron hasta la confluencia (congeladas/descongeladas). Las ADSC conservadas en el pase 0 (P0) se descongelaron y se analizaron después de la confluencia en P1.
Resultados: Las ADSC criopreservadas como P1 dieron como resultado un aumento de la clonogenicidad, el ARN total y la secreción de proteínas en comparación con las frescas. La cuantificación relativa (RQ) y la evaluación de citocinas de IL-6, IL-10, factor de necrosis tumoral (TNF)-α y TLR2 revelaron una regulación positiva moderada de TLR2, mientras que se observaron niveles de secreción de IL-6 significativamente más altos en las ADSC expandidas y criopreservadas a largo plazo.
Conclusión: Nuestros resultados sugieren que las ADSC criopreservadas y expandidas a largo plazo en cultivo eran funcionalmente diferentes y podrían tener propiedades inmunosupresoras deterioradas a través de la modulación de las respuestas inflamatorias por la activación de IL-6 y TLR2.