Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Detección del gen de la proteína de la cubierta del virus del enrollamiento de la hoja de la papa mediante amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa

Mohammad Amin Almasi, Hossein Jafary, Aboubakr Moradi, Neda Zand, Mehdi Aghapour Ojaghkandi y Saeedeh Aghaei

El ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle amplifica el ADN/ARN con alta especificidad y sensibilidad. En este estudio, describimos un ensayo LAMP de transcripción inversa optimizado para la detección del virus del enrollamiento de la hoja de la papa. En primer lugar, se realizó un ensayo DAS-ELISA para detectar el virus en una colección que contenía 40 muestras sospechosas. Por último, se detectaron dos muestras como muestras positivas. Luego, las muestras positivas se verificaron mediante los métodos RT-PCR y RT-LAMP. Además, los resultados demostraron que el ensayo RT-LAMP fue 40 veces sensible y 4 veces más rápido en comparación con la RT-PCR. El ensayo RT-LAMP se realizó en el baño de agua, ya sea sin cualquier máquina de termociclador o instalaciones de laboratorio sofisticadas. Además, en la reacción RT-LAMP, las muestras positivas se detectaron a través de la turbidez producida por el pirofosfato de magnesio. Curiosamente, la aplicación de CaCl2 en lugar de
MgSO4 que crea pirofosfato de calcio en la reacción podría aumentar significativamente tanto la estabilidad como la concentración de turbidez. En consecuencia, podría ser una alternativa interesante al MgSO4. En general, el ensayo RT-LAMP recientemente desarrollado puede ser un método sensible, específico y de bajo costo para la detección temprana del virus del enrollamiento de la hoja de la papa y también de otros patógenos virales de las plantas.