Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Desarrollo y aplicación de un ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección rápida de Fusarium oxysporum f. Sp. lycopersici

Mohammad Amin Almasi, Seyed Mohammad Hosseini Dehabadi, Aboubakr Moradi, Zahra Eftekhari, Mehdi Aghapour Ojaghkandi y Saeedeh Aghaei

Por primera vez, se desarrolló un protocolo de detección rápida y confiable de patógenos que utiliza amplificación isotérmica mediada por bucle colorimétrico (LAMP) para la detección de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici. En este sentido, los seis cebadores LAMP (es decir, F3, B3, FIP, BIP, LF y LB), junto con los cebadores PCR (F y R) se diseñaron sobre la base del gen del ARN ribosómico 28s (número de acceso GenBank: HM057281.1) del genoma del hongo. Si bien los ensayos PCR y LAMP pudieron detectar con éxito muestras infectadas positivas, considerando el tiempo, la seguridad, el costo y la simplicidad, este último fue en general superior. Además, los resultados demostraron que el ensayo LAMP fue 100 veces más sensible y 4 veces más rápido en comparación con la PCR. Curiosamente, la reacción LAMP pudo detectar con éxito Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici sin purificación de ADN (LAMP directa). Mientras tanto, entre los seis colorantes visuales utilizados para detectar productos LAMP, el azul de hidroxinaftol, GeneFinderTM y SYBR Green I podrían producir un cambio de color y un brillo estables y prolongados en un enfoque basado en tubos cerrados, para evitar el riesgo de contaminación cruzada. En conjunto, como LAMP es sensible, rentable, bastante fácil de usar y también puede generar resultados más precisos que los procedimientos de diagnóstico anteriores, como los métodos serológicos, PCR y otros métodos moleculares, proponemos este ensayo colorimétrico como un sistema de reconocimiento de hongos alternativo altamente confiable para el reconocimiento de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici y probablemente otras enfermedades basadas en hongos.