Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Dgcr8 es indispensable para la especificación del linaje cardíaco en células madre embrionarias

Zhiyong Lei, Alain van Mil, Annebel M van de Vrugt, Pieter A Doevendans y Joost PG Sluijter

Objetivo: se ha demostrado que los microARN desempeñan papeles importantes en el comportamiento celular y la especificación del linaje, incluida la diferenciación cardiogénica. Sin embargo, la comprensión completa de sus papeles en la diferenciación de los cardiomiocitos se ha visto impedida debido a la falta de un modelo celular adecuado. Aquí, utilizamos una célula madre embrionaria (ESC) que carece del importante microprocesador Dgcr8 (o Pasha), que permite la introducción de miARN individuales para estudiar su papel en la diferenciación cardíaca y para una selección de objetivos más precisa.
Métodos: Las ESC Dgcr8 KO se cultivaron en medio ESC suplementado con LIF con alimentadores de fibroblastos embrionarios de ratón y se indujo la diferenciación cardíaca utilizando un protocolo de diferenciación basado en el cuerpo embrionario. La diferenciación se controló midiendo los niveles de ARNm y proteína de los marcadores cardiogénicos y los cambios de heterocromatina utilizando tinción inmunofluorescente y PCR semicuantitativa.
Resultados y conclusión: Mostramos que las ESC Dgcr8 KO de hecho carecen de una gran población de ARN pequeños, incluidos, entre otros, microARN maduros. Las células KO tenían una tasa de proliferación menor y no podían diferenciarse hacia el linaje cardíaco. Para nuestra sorpresa, además de un defecto en el procesamiento de microARN, las células madre embrionarias KO Dgcr8 no pueden formar una heterocromatina adecuada ni inactivar elementos repetitivos centroméricos genotóxicos. Nuestros resultados sugieren que, además de controlar el procesamiento de microARN, Dgcr8 puede cumplir una función previamente no reconocida en el silenciamiento de la heterocromatina.