Bioquímica y Bioquímica Analítica

Abstracto

Daño en el ADN de doble cadena evaluado con espectroscopia Raman

Auner AW y Thomas JC

Las roturas de doble cadena de ADN [DSB] y la reparación posterior pueden corregir el daño del ADN o pueden causar por error mutaciones que conducen a daño celular y enfermedad. Las DSB se pueden medir con espectroscopia Raman , utilizando luz dispersa inelástica resultante de vibraciones moleculares distintas de muestras de ADN purificado. Con un tiempo de exposición de 20 s y 2 acumulaciones, el análisis Raman encontró que las vibraciones circulares del ADN del plásmido pBS KS+ eran similares al control del blanco de agua. La restricción del sitio único EcoR1 de pBS KS+ creó ADN lineal y aumentos significativos en los picos Raman a 880, 1044, 1084 y 1458 cm ^-1 . Para explorar más a fondo la detección Raman del daño del ADN, se cultivaron linfocitos Jurkat humanos en +/- 16 μg/ml de Bleocin™. El ADN de las células tratadas con Bleocin ^™ demostró una absorción Raman mejorada a 880, 1044, 1084 y 1458 cm ^-1 en comparación con las células no tratadas. Las células Jurkat son deficientes en la capacidad de expresar la proteína proapoptótica Bax y p53, pero la exposición a Bleocin ^™ aumentó los niveles de TAp73 y, posteriormente, la muerte celular. Debido a la baja interferencia en materiales biológicos y la alta sensibilidad, la espectroscopia Raman es un método rápido y simple para estimar comparativamente la extensión de las DSB relativas. A diferencia de los ensayos cometa, que requieren el análisis de células vivas y moribundas, el ADN aislado se puede recuperar fácilmente de prácticamente cualquier célula, almacenar y realizar el análisis de DSB más tarde.