Genética hereditaria: investigación actual

Abstracto

Evaluación de la terapia génica mediada por AAV con volumen de vector reducido en ratones deficientes en Cngb3, un modelo de acromatopsia

Liu X, Zhang Y, Du W, Shi W, Tao Y, Deng W, Li J, Zhao C, Pang J

Objetivo: Este estudio fue diseñado para investigar si el volumen del vector utilizado para la inyección subretinal puede reducirse para transfectar la retina completa del ratón C57bl/6J y si puede restaurar la función de los conos en un modelo de ratón knock out (KO) de Cngb3.
Métodos: Los ratones C57bl/6J y los ratones Cngb3 KO recibieron una inyección subretinal de 0,5 μL o 1 μL del vector AAV5-smCBAmCherry y del vector AAV5-IRBP/GNAT2-hCngb3, respectivamente. Se prepararon preparaciones completas de retina y secciones congeladas de los ojos del ratón de tipo salvaje para evaluar el área transfectada. Se registraron electrorretinogramas (ERG) adaptados a la oscuridad y a la luz dos meses después de la inyección del vector en los ojos de ratones Cngb3 KO.
Resultado: En la retina de ratones de tipo salvaje inyectados con AAV5-smCBA-mCherry, no se observó diferencia entre los volúmenes de inyección. Se observaron células epiteliales pigmentarias de la retina (EPR) y fotorreceptoras positivas para mCherry en toda la retina. En ratones Cngb3 KO inyectados con AAV5-IRBP/GNAT2-hCngb3, los ratones inyectados con 1 μL mostraron un promedio más alto de restauración de ERG fotópico que los ratones inyectados con 0,5 μL. Sin embargo, los ERG escotópicos fueron más bajos en los ratones inyectados con 1 μL, lo que indica que volúmenes de inyección más altos resultaron en más daños.
Conclusión: Un volumen reducido (0,5 μL) de vector indujo menos daños. Sin embargo, dosis más altas de vector (1 μL) restauran una mayor función de ERG en ratones Cngb3 KO.