Revista de bioequivalencia y biodisponibilidad

Abstracto

Cuantificación de hidroxocobalamina en plasma humano mediante cromatografía líquida de alto rendimiento acoplada a espectrometría de masas en tándem con electrospray en un estudio farmacocinético

Gustavo D. Mendes, Fabiana D. Mendes, Marinalva Ferreira Sampaio, Antonio Sergio Silveira, Lu Shi Chen, Khalid M. Alkharfy y Gilberto De Nucci

Se describe un método rápido, sensible y específico para cuantificar la hidroxocobalamina en plasma humano utilizando paracetamol como estándar interno (IS). El analito y el IS se extrajeron del plasma mediante extracción líquido-líquido utilizando un disolvente orgánico (etanol 100%; -20°C). Los extractos se analizaron mediante cromatografía líquida de alta resolución acoplada a espectrometría de masas en tándem por electrospray (HPLC-MS-MS). La cromatografía se realizó en una columna analítica Prevail C8 de 3 μm (2,1×100 mm de diámetro interno). El método tuvo un tiempo de ejecución cromatográfica de 3,4 min y una curva de calibración lineal en el rango de 5-400 ng.mL-1 (r>0,9983). El límite de cuantificación fue de 5 ng.mL-1. El método también se validó sin el uso del estándar interno. La precisión en la validación intralote con IS fue del 9,6%, 8,9%, 1,0% y 2,8%, mientras que sin IS fue del 9,2%, 8,2%, 1,8% y 1,5% para 5, 15, 80 y 320 ng/mL, respectivamente. La exactitud en la validación intralote con IS fue del 108,9%, 99,9%, 98,9% y 99,0%, mientras que sin IS fue del 101,1%, 99,3%, 97,5% y 92,5% para 5, 15, 80 y 320 ng/mL, respectivamente. La precisión en la validación entre lotes con IS fue del 9,4%, 6,9%, 4,6% y 5,5%, mientras que sin IS fue del 10,9%, 6,4%, 5,0% y 6,2% para 5, 15, 80 y 320 ng/mL, respectivamente. La exactitud en la validación entre lotes con IS fue del 101,9%, 104,1%, 103,2% y 99,7%, mientras que sin IS fue del 94,4%, 101,2%, 101,6% y 96,0% para 5, 15, 80 y 320 ng/mL, respectivamente. Este procedimiento HPLC-MS-MS se utilizó para evaluar la farmacocinética de la hidroxocobalamina después de la inyección intramuscular de 5000 μg en voluntarios sanos de ambos sexos (10 hombres y 10 mujeres). Los voluntarios presentaron las siguientes características clínicas (según género y expresadas como media ± DE [rango]): varones: edad: 32,40 ± 8,00 años [23,00-46,00], altura: 1,73 ± 0,07 m [1,62-1,85], peso corporal: 72,48 ± 10,22 Kg [60,20- 88,00]; mujeres: edad: 28,60 ± 9,54 años [18,00-44,00], altura: 1,60 ± 0,05 m [1,54-1,70], peso corporal: 58,64 ± 6,09 Kg [51,70- 66,70]. Los siguientes parámetros farmacocinéticos se obtuvieron a partir de las curvas de concentración plasmática de hidroxocobalamina frente al tiempo: AUClast, T1/2, Tmax, Vd, Cl, Cmax y Clast. Los parámetros farmacocinéticos fueron 120 (± 25) ng/mL para Cmax, 2044 (± 641) ng.h/mL para AUClast, 8 (± 3,2) ng.mL-1 para Clast, 38 (± 15,8) h para T1/2 y 2,5 (rango 1-6) h para Tmax. Las voluntarias femeninas presentaron un AUC significativamente menor (p = 0,0136) (1706 ± 704) ng.h/mL) y un aclaramiento mayor (p = 0,0205) (2,91 ± 1,41 L/h), en comparación con los hombres 2383 ± 343 ng.h/mL y 1,76 ± 0,23 L/h, respectivamente. Estas diferencias farmacocinéticas podrían explicar la mayor prevalencia de deficiencia de vitamina B12 en pacientes femeninas . El método descrito se validó bien sin el uso del estándar interno y este enfoque debería investigarse en otros métodos HPLC-MS-MS.