Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Identificación y caracterización de moléculas con actividad antimicrobiana del epidídimo de conejo mediante un enfoque proteómico

Reddy KVR, Sukanya Deva, Clara Aranha, Mandar S. Patgaonkar y Gauri Bhonde

Los péptidos antimicrobianos (AMP) son componentes clave del sistema inmunitario innato del huésped y forman la primera línea de defensa del huésped contra los patógenos invasores. En el presente estudio se intentó identificar y caracterizar los AMP que se sintetizan en las células epiteliales del epidídimo (EPEC) del conejo, Oryctologus cuniculus. La inducción ex vivo de EPEC con el ligando TLR-9, CpG-ODN-2006, resultó en una regulación positiva de varios AMP. Estas moléculas se identificaron en los extractos ácidos de homogeneizados de tejido epididimario agrupados utilizando un enfoque proteómico (ultrafiltración, cromatografía de intercambio catiónico, RP-HPLC, transferencia Western Far - FWB, electroforesis en gel de poliacrilamida 2D y MALDI-TOF-MS). La fracción agrupada de RP-HPLC (picos 1-5), denominada proteína antimicrobiana secretora del epidídimo de conejo (RESAMP), mostró actividad contra varios patógenos. Los resultados de FWB, 2D-PAGE y MALDI-TOF-MS revelaron que de las ~19 proteínas identificadas, cuatro secuencias proteicas (subunidades de hemoglobina-α/β, transtiretina y calreticulina) reaccionaron con antígenos del VIH (gp120, gp17, gp41, p24). Una de las cuatro secuencias (VLSHHFGKEFTPQVQ) mostró una homología >90% con la proteína hemoglobina-β. Un péptido de 29 meros con la secuencia VLSHHFGKEFTPQVQ se designó como hemoglobina beta del epidídimo de conejo (REHbβP). El péptido sintetizado mostró el mayor puntaje de Mowse basado en probabilidad (PBMS) y demostró una buena actividad bactericida (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y Candida albicans. REHbβP no mostró citotoxicidad contra células endocervicales humanas (End1/E6E7) y eritrocitos de conejo. Los resultados inmunofluorescentes revelaron que REHbβP se localizó en los estereocilios del epidídimo y en el acrosoma de los espermatozoides eyaculados de conejo. Hasta donde sabemos, este es el primer estudio que describe la detección de AMP en el epidídimo de conejo. En conclusión, el presente estudio sugiere que REHbβP derivado de EPEC puede tener potencial terapéutico en el manejo del bienestar reproductivo de humanos y animales.