Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Método mejorado para el aislamiento de cardiomiocitos de rata neonatal con mayor producción de células progenitoras cardíacas C-Kit+

Jennifer Rutering, Matthias Ilmer, Alejandro Recio, Michael Coleman, Jody Vykoukal y Eckhard Alt

La terapia celular representa un nuevo paradigma prometedor para el tratamiento de las enfermedades cardíacas, una de las principales causas de muerte en el mundo industrializado. El reciente descubrimiento de células progenitoras cardíacas (CPC) c-Kit+ residentes en los tejidos ha impulsado los esfuerzos científicos para explotar estas células terapéuticamente para intervenciones regenerativas, y el cultivo primario de cardiomiocitos es un modelo in vitro común para investigar los mecanismos moleculares básicos que subyacen a la degeneración y regeneración cardíacas. Los protocolos actuales para el aislamiento de cardiomiocitos con frecuencia dan como resultado un bajo rendimiento celular y una disminución insuficiente de fibroblastos, que luego sobrecrecen en exceso a los cardiomiocitos en cultivo. En este protocolo describimos un método mejorado para el aislamiento de cardiomiocitos de rata neonatal que también permite un mayor rendimiento de CPC. Las técnicas suaves de procesamiento enzimático y mecánico de tejidos garantizan un alto número de células y viabilidad, mientras que la posterior centrifugación en gradiente de densidad de Percoll minimiza los fibroblastos. Comparamos las ventajas de diferentes enzimas y descubrimos que la colagenasa 2 por sí sola produce rendimientos muy altos de cardiomiocitos, mientras que la aplicación de la mezcla de enzimas Matrase™ aumenta el rendimiento relativo de las CPC c-Kit+ hasta en un 35 %. Los cardiomiocitos y las CPC aislados con este protocolo pueden constituir una fuente celular importante para la investigación de enfermedades cardíacas, así como para enfoques terapéuticos basados ​​en células.