Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Purificación, secuenciación de aminoácidos y termoestabilidad de una esterasa extracelular de bajo peso molecular producida por Bacillus subtilis NRRL 41270 en fermentación

Papagianni M y Papamichael EM

Se encontró que la actividad de esterasa extracelular en los caldos de fermentación de Bacillus subtilis NRRL 41270 residía en una proteína pequeña con un peso molecular inferior a 10 kDa. Después de la purificación, la actividad de esterasa en dibutirato de fluoresceína se estimó en 12 U/min/mg de proteínas. La saturación de la enzima se observó a una concentración de sustrato de 5 μM. La esterasa producida hidrolizó la tributirina. Su actividad específica se estimó en 17,8 μmol de ácido liberado/min/mg de proteínas. La proteína pequeña se sometió a cromatografía de exclusión por tamaño, SDS-PAGE y secuenciación de aminoácidos. El análisis reveló una secuencia de los siguientes residuos de aminoácidos: eevaetysfyhitphdystshispapvqffspap, según la cual la molécula tiene 34 residuos de aminoácidos y una masa molecular calculada de 3853, que concordaba con los resultados de la filtración en gel y SDS-PAGE. El análisis secuencial y el uso de herramientas bioinformáticas no mostraron similitudes significativas con proteínas conocidas, pero revelaron una molécula fuertemente hidrofóbica, con una conformación α-helicoidal en el extremo N-terminal, siendo el resto de la molécula rica en láminas β. La enzima resultó ser termoestable, con más del 85% de la actividad original mantenida después de 120 h de incubación a 60°C. El organismo productor y las características de la microenzima sugieren el caso de un biocatalizador biotecnológicamente interesante que debería investigarse más en términos de su estabilidad y características de producción.