Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Generación robusta, eficiente y pura de células madre mesenquimales inducidas a partir de células madre pluripotentes inducidas por ARNm en suspensión

Rajneesh Verma, Pornpun Saengmuang, Tanabodee Payuha, Julie D Mendoza, Rotsarin Narang, Naphapatsorn Bondee, Sergei Dmitrievs y Paul Michael Collier

Las células madre mesenquimales (MSC) participan en muchos ensayos clínicos prometedores que abordan enfermedades muy complicadas. Muchos factores determinan la seguridad en estos ensayos clínicos, como la pureza de la población de células MSC derivadas de tejido que se utiliza en las terapias. Además, la eficacia de las MSC inyectadas debe probarse in vitro , antes de la aplicación, a través de la capacidad de proliferación y la reproducibilidad en pasajes continuos. Además, la importancia de elegir la fuente correcta de derivación de MSC para una terapia celular y un trasplante exitosos. Este estudio demuestra la generación robusta de iMSC a partir de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) de un donante humano sano (con una prueba genética completa realizada previamente) utilizando un método no integrativo (ARNm). Este método de conversión comprende (i) diferenciar una población de iPSC en suspensión sin iMatrix, (ii) pasar las células diferenciadas en el paso (i) en presencia de un medio MSC acondicionado durante un tiempo y en condiciones suficientes para producir iMSC en cultivo a largo plazo sin signos de memoria epigenética.

El análisis de la expresión de marcadores pluripotentes (Oct-4, SSEA-4, Sox-2, Tra-1-60) se confirmó mediante citometría de flujo e inmunocitoquímica a través de una evaluación visual con microscopio de fluorescencia. No se desarrolló teratoma mediante la inyección in vivo de la población de iMSC en hámsteres machos, lo que confirma la pureza transformada de las iMSC y la propiedad inmunomoduladora en cultivo sin iPSC respectivamente. Para los estudios de ciclo celular y senescencia, se probaron iMSC in vitro puras mediante citometría de flujo utilizando análisis de expresión de CD73, 90 y 105 y se compararon con UC-MSC. Más tarde, las iMSC demostraron una tridiferenciación de condrocitos, osteocitos y adipocitos en relación con las UC-MSC, lo que podría hacer posible abordar los inconvenientes del uso de MSC adultas y, por lo tanto, proporcionar una herramienta valiosa para su uso futuro en varios entornos clínicos.