Revista de bioequivalencia y biodisponibilidad

Abstracto

Cuantificación simultánea de vitamina D-2, vitamina D-3 y sus metabolitos 25-hidroxi en plasma humano mediante cromatografía líquida de alta resolución

Syed N Alvi, Ahmed Yusuf y Muhammad M Hammami

Se desarrolló y validó un método simple y confiable de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) para la determinación simultánea de vitamina D-2 (VD-2), vitamina D-3 (VD-3), 25-hidroxivitamina D-2 [25 (OH) VD-2] y 25-hidroxivitamina D-3 [25 (OH) VD-3] en plasma humano. Las muestras de plasma se desproteinizaron con una mezcla de metanol y 2-proponol y se extrajeron con hexano. Después de la evaporación, el residuo se disolvió en metanol:agua (9,6:0,4, v/v), se centrifugó y luego se inyectó una solución transparente en una columna Zorbax C18. La fase móvil (modo de elución en gradiente) consta de metanol, acetonitrilo y agua (pH = 3,0); los eluyentes se monitorearon mediante un detector de matriz de fotodiodos (longitud de onda establecida a 265 nm). La relación entre la concentración de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, 25(OH) VD-3 en plasma y su relación de área de pico con el IS fue lineal en el rango de 5 a 100 ng/mL. Los coeficientes de variación para el ensayo interdiario e intradiario fueron todos ≤ 9,7% y los sesgos ≤ 13,1%. Las recuperaciones medias de extracción de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 y 25(OH) VD-3 del plasma fueron todas superiores al 80%. El método se aplicó para la determinación de los niveles de vitamina D en plasma obtenido de sujetos sanos. Además, se utilizó para evaluar la estabilidad de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 y 25(OH) VD-3 en plasma en diversas condiciones encontradas en el laboratorio clínico.