Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Inducción exitosa de células madre pluripotentes a partir de un modelo murino con enfermedad de Fabry: hacia el desarrollo de una terapia génica lentiviral segura

Makoto Yoshimitsu, Koji Higuchi, Naomichi Arima, Jeffrey A Medin y Toshihiro Takenaka

Las células madre pluripotentes inducidas (iPS) son reconocidas actualmente como una herramienta valiosa para la reparación celular mediante trasplante autólogo. Estas células se pueden obtener a partir de células somáticas mediante la inducción de los factores de transcripción Oct-3/4, Klf4 y Sox2. En este estudio, logramos establecer células iPS a partir de fibroblastos de la punta de la cola de un ratón deficiente en α-galactosidasa A, un modelo murino de enfermedad de Fabry bien conocido. Estas células Fabry-iPS exhibieron un fenotipo de célula madre embrionaria (ES), caracterizado por la expresión de SSEA-1, aumento de la actividad de la fosfatasa alcalina, silenciamiento del transgén retroviral y formación de cuerpos embrionarios (EB). La inoculación subcutánea de células Fabry-iPS en ratones desnudos resultó en la formación de teratomas. El día 6, los EB en medios de diferenciación mostraron expresión génica específica del linaje hematopoyético. Además, observamos la contracción espontánea de los EB cultivados en células del estroma OP9 durante 5-7 días. La RT-PCR demostró que varios genes marcadores cardíacos, como Nkx2.5, Gata4, Tnnt2 (troponina T cardíaca) y Mlc2a se expresaban más en cultivos de diferenciación de células Fabry iPS que en células alimentadoras de control. Para evaluar su posible uso para la terapia génica, se realizó una transducción lentiviral de células Fabry-iPS con ADNc de α-galactosidasa-A, el gen terapéutico para la enfermedad de Fabry. Esta transducción dio como resultado una actividad elevada de α-galactosidasa A intracelular y secretada. El perfil de expresión génica específico de las células ES permaneció inalterado por la transferencia génica terapéutica lentiviral durante más de 30 días después de la transducción. Estos hallazgos demuestran que las células Fabry-iPS son fáciles de obtener y aptas para su uso en terapia génica.