Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Un ensayo funcional para el endodermo definitivo putativo de ratón y humano utilizando cultivos de embriones completos de pollo

Martina Johannesson, Henrik Semb, Palle Serup y Mattias Hansson

Introducción: Las células madre embrionarias (CME) representan una fuente celular potencial para el tratamiento de enfermedades degenerativas como la diabetes. Varios estudios han abordado la generación de endodermo definitivo (ED) a partir de esta fuente celular al intentar recapitular los eventos de señalización que ocurren durante la embriogénesis. Sin embargo, la diferenciación posterior del ED no ha logrado generar células beta productoras de insulina funcionales. Para asegurarnos de que tenemos el material de partida correcto, necesitamos caracterizar completamente el ED derivado de las CME, evaluando si las células son funcionalmente equivalentes a su contraparte in vivo. Por lo tanto, el propósito de este estudio es describir un método mediante el cual se pueda evaluar la funcionalidad in vivo del ED derivado de las CME.

Métodos: Mediante diferenciación dirigida, se obtuvo un posible DE a partir de células madre embrionarias humanas y de ratón. Este posible DE se trasplantó posteriormente en el endodermo de embriones de pollo para determinar si se producía integración. El posible DE se analizó mediante expresión de genes y proteínas antes del trasplante y 48 horas después del mismo.

Resultados: El DE putativo, derivado de células madre embrionarias de ratón y humano, se integró con éxito en el endodermo de pollo. Los genes específicos del endodermo se expresaron en el DE putativo antes de la integración y las proteínas específicas del endodermo se evaluaron 48 h después del trasplante.

Conclusiones: Describimos el procedimiento metodológico detallado para el trasplante de DE putativo derivado de ESC, y el posterior análisis de la migración y desarrollo de las células injertadas. Nuestros resultados muestran que el DE putativo se integra con el endodermo del pollo y participa en el desarrollo del intestino del pollo, lo que indica la generación de DE funcional a partir de ESC. Este ensayo funcional se puede utilizar para evaluar la generación de DE funcional derivado de ESC tanto humanas como de ratón y proporciona una herramienta valiosa para la caracterización celular. Este es un paso inicial importante en el proceso de diferenciación hacia células beta completamente funcionales.