Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Un método sencillo, rápido y eficaz para aislar el ARN del virus del mosaico del pepino a partir de la fruta del tomate

Amal Souiri, Mustapha Zemzami, Khadija Khataby, Hayat Laatiris, Saaid Amzazi y Moulay Mustapha Ennaji

La principal preocupación en la detección molecular de patógenos virales de ARN en plantas es la consecución de una buena calidad del ARN extraído. Existen varios métodos para aislar ARN de tejidos ricos y pobres en polisacáridos y de otras plantas recalcitrantes. Sin embargo, el uso de métodos que consumen mucho tiempo y reactivos y que implican productos químicos peligrosos es algo engorroso y problemático, especialmente cuando no es necesario para fines específicos como el aislamiento de ARN viral de la fruta del tomate, de ahí el objetivo de este artículo. Describimos un método alternativo, simple y rápido para preparar ARN viral de la fruta del tomate sin pasos de extracción y purificación de ARN, caso del virus del mosaico del pepino ( PepMV ).

El método emplea un tratamiento mecánico y suspensión en agua. La calidad del ARN obtenido se evaluó mediante lecturas espectrométricas y se validó en ensayos de RT-PCR. El protocolo utilizado se comparó con el método TRIzol habitual. Los resultados mostraron que el rendimiento y la calidad del ARN obtenido utilizando el método propuesto son eficientes y de alto rendimiento en comparación con el método TRIzol. Además, el método desarrollado permitió una detección sensible y reproducible de las bandas predichas de PepMV en RT-PCR. Por lo tanto, la detección molecular de PepMV en frutos de tomate se puede realizar de forma rutinaria sin un aislamiento de ARN fastidioso. Además, esto hará que el diagnóstico de otros virus de ARN que infectan los cultivos de tomate sea más fácil y requiera menos tiempo, en comparación con los otros métodos realizados con kits comerciales costosos y aquellos que involucran productos químicos tóxicos. Finalmente, el método establecido descrito contribuirá de manera efectiva en las estrategias de los programas fitosanitarios y de certificación de cultivos de tomate en todo el mundo.