Pharmaceutica Analytica Acta

Abstracto

Un sistema de monitoreo de contracción de gel de colágeno tridimensional que utiliza una malla trabecular porcina para la detección de agentes anti-presión intraocular

Hiroyoshi Kasai, Mitsue Ishisaka, Eiichi Shirasawa y Hideaki Hara

Se cree que el estado contráctil de la malla trabecular (TM) afecta el flujo de salida del humor acuoso y la presión intraocular (PIO). Se ha sugerido que la relajación de la TM puede aumentar el flujo de salida convencional al aumentar la porosidad del tejido y conducir a una disminución de la PIO, por lo tanto, podría ser un objetivo terapéutico para el glaucoma. En consecuencia, investigamos los efectos de varios agentes sobre la contractilidad de células de malla trabecular porcina (pTM) cultivadas utilizando un ensayo de gel de colágeno tridimensional (3-D), con el fin de desarrollar un método de detección para identificar nuevos agentes anti-PIO. Identificamos células pTM, obtenidas de globos oculares porcinos, por la forma celular y la expresión de receptores de lipoproteína de baja densidad (LDL). Las células pTM, cuando se incrustaron en geles de colágeno, mostraron una actividad contráctil dependiente de la concentración de suero bovino fetal (FBS). Varios inhibidores de quinasas, especialmente inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina celular (rescovitina), quinasa de proteína dependiente de rho y Ca2+ (Y-27632), quinasa de tirosina (tirfostina AG879), quinasa de fosfatidilinositol 3 (bisindolilmaleimida I, BIM I) y quinasa de Ca2+/calmodulina (chelerythrine), inhibieron fuertemente la contracción del gel de colágeno. Esta contracción también fue inhibida por el ácido etacrínico, por inhibidores de Na+, K+-ATPasa (ouabaína), Ca2+-ATPasa (thapsigargina) y 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG-CoA) reductasa, por un inhibidor no selectivo de la fosfodiesterasa (papaverina), y por adenosina A2 (metrifudil) y agonistas del receptor de cannabinoides (CP-55940). Además, BIM I, simvastatina, BQ-123 y CP-55940 demostraron citotoxicidad parcial. Las actividades inhibidoras de la queleritrina y la tapsigargina también se atribuyeron a la citotoxicidad. Estos hallazgos indican que este sistema de monitoreo de la contracción del gel de colágeno en 3D in vitro podría usarse como un método de detección rápido y sensible para identificar nuevos agentes que inducen la relajación de las células pTM y podría detectar simultáneamente los efectos principales y secundarios.