Tecnología genética

Abstracto

Aplicación de la recombinación homóloga dirigida por CRISPR/cas9 a la generación de células tumorales humanas con eliminación condicional de un locus de microARN ligado al cromosoma X

Aurélie Van Tongelen, Axelle Loriot, Olivier De Backer y Charles De Smet

El estudio de la función celular de los microARN requiere de estrategias genéticas para generar su pérdida de función. Recientemente, se ha propuesto un nuevo enfoque de deleción genómica dirigida, que se basa en la inducción de cortes específicos de ADN con complejos de ribonucleoproteína Cas9/gRNA, combinados con la inserción dependiente de recombinación homóloga de casetes que contienen secuencias para sistemas Cre-lox o FLP-FRT. En este artículo, presentamos un informe técnico que describe la aplicación de este procedimiento de recombinación homóloga dirigida por CRISPR/Cas9 a la generación de células tumorales humanas en las que se puede inducir la eliminación condicional de un grupo de microARN ligado al cromosoma X (miR-105/miR-767). Describimos los pasos sucesivos de ingeniería genética y selección de clones celulares que nos permitieron generar células con la edición genómica esperada.