Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Expresión basada en el promotor de arabinosa de la hormona de crecimiento humana recombinante biológicamente activa en E. coli: estrategias para la sobreexpresión y métodos de purificación simples

Sudheerbabu Soorapaneni, Anjali Apte-Deshpande, Ketaki Sabnis-Prasad, Jitendra Kumar, Veena A Raiker, Prakash Kotwal y Sriram Padmanabhan

Se diseñó e implementó un sistema de expresión basado en el promotor de arabinosa en E. coli para la producción y purificación de la hormona de crecimiento humana recombinante (rhGH). Los estudios en matraces agitados indicaron cantidades apreciables de rhGH expresada en el vector pBAD24 modificado (pBAD24M) en comparación con el vector pBAD24 original. Mientras que los niveles de rhGH alcanzaron apenas 75 mg l ^-1 con pBAD24 en un biorreactor, alcanzaron ~1860 mg l ^-1 con el vector pBAD24M en condiciones similares, a juzgar por la densitometría de proteínas resueltas por electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE). La proteína rhGH se purificó con éxito a partir de cuerpos de inclusión después de la desnaturalización con urea mediante dos simples pasos de cromatografía de intercambio iónico con una recuperación general del 40%, lo que equivale a ~750 mg l ^-1 de hGH purificada, que es el rendimiento más alto informado de rhGH purificada hasta la fecha. Se caracterizó la rhGH purificada derivada de bacterias mediante estudios de secuencia N-terminal, espectros de CD, análisis de huella de masa y análisis en el bioanalizador Agilent 2100. La bioactividad de la rhGH purificada fue comparable con la de la hGH (somatotropina) disponible comercialmente.