Revista de Bacteriología y Parasitología

Abstracto

Caracterización de proteínas solubles y unidas a membrana de Toxoplasma gondii como marcadores diagnósticos de infección

Imen Khammari, Sami Lakhal, Benoît Westermann, Alia Benkahla, Aïda Bouratbine, Alain Van Dorsselaer, Moncef Ben Saïd, Christine Schaeffer-Reiss y Fatma Saghrouni

En el presente estudio, aplicamos la combinación de electroforesis en gel unidimensional, inmunotransferencia y cromatografía líquida nanométrica-espectrometría de masas en tándem (nanoLC-MS/MS) para identificar proteínas inmunogénicas potenciales de taquizoítos de Toxoplasma gondii que puedan utilizarse para el desarrollo de ensayos. confiables en el serodiagnóstico de toxoplasmosis adquirido en sujetos inmunocompetentes. Para este propósito, desarrollamos una inmunotransferencia utilizando extractos solubles y de membrana de taquizoítos GT1 de Toxoplasma gondii y analizamos 194 sueros positivos y 100 negativos obtenidos de mujeres embarazadas.

Se seleccionan cinco bandas de antígenos solubles (98 kDa, 36 kDa, 33 kDa, 32 kDa y 21 kDa) y cuatro bandas de antígenos de membrana (41 kDa, 35 kDa, 32 kDa y 30 kDa) como las más valiosas en términos de sensibilidad y especificidad. Entre estas bandas, solo dos bandas de antígeno soluble (33 kDa y 32 kDa) y dos bandas de antígeno de membrana (32 kDa y 30 kDa) mostraron una especificidad ≥ 90%.

Luego de un análisis de espectrometría de masas y bioinformática, se identifican 7 proteínas como marcadores potenciales para el serodiagnóstico de toxoplasmosis. Estas proteínas son: SRS34A, GRA7, GRA1, DG32, MIC5, ROP5 y Toxofilina. Estas proteínas mostraron una homología de 86% a 100% con proteínas de las cepas VEG y ME49 de T. gondii y una homología de 58% a 87% con Hammondia hammondi ; y pueden considerarse como candidatos atractivos para el desarrollo de una prueba de inmunocromatografía que pueda usarse para el diagnóstico rápido de toxoplasmosis y como prueba confirmatoria cuando las técnicas de rutina dan resultados equívocos.