Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Combinación de transcripción inversa y análisis de polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción multienzimáticos para la detección rápida de Escherichia coli

Akifumi Hosoda, Arata Komaba, Michiru Kishimoto y Hiroto Tamura

Los métodos de cultivo se utilizan para monitorear microorganismos patógenos en alimentos. Sin embargo, los métodos actuales requieren unos días para producir resultados, y los productos a menudo se lanzan a la venta antes de que estén disponibles los resultados del análisis microbiológico. Desarrollamos un sistema de extracción de ARN y detección de microorganismos utilizando muestras de alimentos modelo inoculadas con Escherichia coli K-12 y O157:H7 (GTC 14536) (0 UFC/g y 1×101–104 UFC/g). Antes de la extracción de ARN, se inocularon células vivas o muertas en las muestras de alimentos, las muestras se homogeneizaron y los ARN extraídos se utilizaron para sintetizar ADNc utilizando 6-mer aleatorios. Se utilizó PCR para analizar los genes diana, y los productos de PCR se digirieron con dos enzimas de restricción (HhaI y HaeIII) para analizar el polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP). La PCR confirmó la extracción de ARN y la síntesis de ADNc de hasta 1×101 UFC/g de muestras de células vivas. El método de polimorfismo de ligandos de enzimas múltiples (MeRFLP) demostró que los tamaños de los fragmentos de ADN obtenidos eran consistentes con los tamaños teóricos de los fragmentos, lo que sugiere que la técnica de polimorfismo de ligandos de transcripción inversa (RT-MeRFLP) podría identificar las bacterias objetivo. Estos resultados sugieren que la RT-MeRFLP, que no requiere cultivo y puede completarse en 6,5 h, es un enfoque prometedor para un sistema de bajo costo, rápido y confiable para identificar bacterias en alimentos.