Genética hereditaria: investigación actual

Abstracto

Comparación de la enumeración de células CD34+ y CD45+ mediante tres métodos fluorescentes diferentes

Tzonka Godjevargova

Resumen
Laenumeración de células madre y leucocitos en sangre periférica y muestras de aféresis se realizó utilizando la expresión de biomarcadores de proteínas CD34+ y CD45+ en su superficie celular. El objetivo de este estudio fue el recuento simultáneo de células madre vivas y leucocitos en muestras de aféresis utilizando dos conjugados fluorescentes diferentes. El conjugado entre el anticuerpo monoclonal anti-CD34 y el colorante fluorescente DR110 tiñó las células madre de color verde. El conjugado entre el anticuerpo monoclonal anti-CD45 y el colorante fluorescente ATTO620 tiñó los leucocitos de color rojo. Los conjugados anticuerpo anti-CD34 – DR110 y anticuerpo anti-CD45 – ATTO620 se prepararon mediante el método de carbodiimida y se purificaron mediante filtración en gel. El recuento se realizó utilizando un nuevo microscopio de fluorescencia automático EasyCounter BC. Las células muertas se contaron con el colorante monometilcianina – Sofia Green. Se realizaron los análisis de seis muestras de aféresis. Los resultados obtenidos con EasyCounter BC se compararon con los obtenidos con otros dos métodos estándar: citometría de flujo (Guava easyCyte 8HT) y método de microscopio fluorescente (Olympus BX51). Los recuentos de células obtenidos con EasyCounter BC y el citómetro de flujo fueron muy similares. Los coeficientes de variación de los resultados obtenidos con EasyCounter BC (3-6%) fueron inferiores a los obtenidos con el citómetro de flujo (5-8%) y con el microscopio Olympus (14-18%).