Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Comparación de diferentes métodos para el aislamiento de ADN bacteriano a partir de tejidos de ostras de venta minorista

Qian Zhang, Min Dai, Yanhong Liu, Min Zhou, Xianming Shi y Dapeng Wang

Las ostras se alimentan por filtración y bioacumulan bacterias en el agua mientras se alimentan. Para evaluar el ADN genómico bacteriano extraído de los tejidos de ostras de venta al por menor, incluidas las branquias y las glándulas digestivas, se utilizaron cuatro métodos de aislamiento. La extracción de ADN genómico se realizó utilizando el Allmag™ Blood Genomic DNA (Allrun, Shanghai, China), los kits de extracción de ADN genómico bacteriano MiniBEST (Takara, Dalian, China) y los métodos de fenol-cloroformo y lisis por ebullición. La concentración del ADN genómico se midió utilizando un espectrofotómetro. La pureza del ADN genómico se evaluó mediante la amplificación por PCR del 16S rDNA seguida de la determinación de la eficiencia de clonación del amplicón en el vector pMD19-T. Además, la calidad del ADN bacteriano también se evaluó mediante ensayos de PCR utilizando un par de cebadores específicos de la especie para Vibrio parahaemolyticus. Nuestros resultados mostraron que los dos kits comerciales produjeron la mayor pureza de ADN, pero con los rendimientos más bajos. El método de fenol-cloroformo produjo el mayor rendimiento, aunque requirió mucho tiempo. El método de lisis por ebullición fue simple y rentable; sin embargo, solo fue adecuado para aislar ADN genómico de bacterias presentes en muestras de venta minorista después de un paso de enriquecimiento. Los dos kits comerciales fueron buenos candidatos para la extracción de ADN genómico de tejidos de ostras de venta minorista sin enriquecimiento.