Revista de Investigación y Terapéutica Biomolecular

Abstracto

Acilación compleja de angiotensina II mediante reactivos de biotina unidos a N-hidroxisulfosuccinimida

Qinfeng Liu, Andrés Lam y Achyut Kathuria

Las biotinas unidas a N-hidroxisulfosuccinimida (sulfoNHS-biotinas) son marcadores de biotina solubles en agua que se utilizan comúnmente para conjugar una fracción de biotina a proteínas mediante una rápida N-acilación de aminas primarias. Se identificó mediante LC-MS una O-acilación inesperada por sulfoNHSbiotina en la tirosina de la angiotensina II (Ag-II) y una acilación en un tercer sitio que no se pudo caracterizar, además de la N-acilación esperada en el extremo N de Ag-II. La N-acilación solo sufre una hidrólisis incompleta en ácido fórmico al 0,1 %, no a pH 7,2 y 8,0, mientras que dos acilaciones inesperadas se hidrolizan en ambas condiciones, pero su hidrólisis en ácido fórmico al 0,1 % fue mucho más rápida. El tratamiento con ditiotreitol catalizó selectivamente la hidrólisis de ambas acilaciones inesperadas, pero no de la N-acilación de Ag-II. El rendimiento máximo de la O-acilación de la tirosina Ag-II fue del 99% a pH 7,2 y del 95% a pH 8,0 en comparación con la N-acilación de la lisina cuando reaccionó con un exceso de sulfoNHS-biotina con estos rendimientos del 94% a pH 7,2 y del 96% a pH 8,0. La acilación del tercer sitio no caracterizado de Ag-II mostró un rendimiento máximo de aproximadamente el 17% a pH 7,2, pero un rendimiento mayor (≥ 47%) a pH 8,0 en 30 min. La O-acilación inesperada de la tirosina Ag-II ocurrió en 1 min a pH 7,2 o pH 8,0, tan rápidamente como la N-acilación, mientras que la otra acilación inesperada requirió más tiempo para completarse a pH 8,0.