Revista de trastornos sanguíneos y transfusiones

Abstracto

Criopreservación y recuento de células progenitoras endoteliales humanas y células endoteliales para ensayos clínicos

Bogoslovsky T, Wang D, Maric D, Scattergood-Keepper L, Spatz M, Auh S y Hallenbeck J

Antecedentes: Las células progenitoras endoteliales (EPC) son marcadores de lesión endotelial y pueden servir como un marcador sustituto para la reparación vascular en ensayos clínicos intervencionistas. Los objetivos de este estudio fueron modificar un método de aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y enumeración de EPC y células endoteliales maduras (EC) de sangre periférica y evaluar la influencia de la criopreservación en la viabilidad de PBMC y en los números de EPC y EC. Pacientes/Métodos: Las EPC y EC se analizaron en voluntarios sanos en PBMC recién aisladas recolectadas en CPT (tubos de preparación de células) y en PBMC criopreservadas con: 1) Medio de congelación de cultivo celular Gibco RecoveryTM, 2) medio de congelación personalizado. La viabilidad de PBMC se probó utilizando DAPI. Las EPC se clasificaron para CD45- CD34+CD133+/-VEGFR2+/- y las EC se clasificaron para CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/-. Resultados: La criopreservación durante 7 días a -80 °C redujo las PBMC viables de 94 ± 0,5 % (frescas) a 84 ± 4 % (el medio personalizado) y a 69 ± 8 % (medio Gibco), mientras que la criopreservación a -65 °C redujo la viabilidad a 60 ± 6 % (p < 0,001, el medio personalizado) y 49 ± 5 % (p < 0,001, medio Gibco). En muestras frescas, las células madre embrionarias tempranas (CD45-CD34+CD133+VEGFR2+) se enumeraron como 0,2 ± 0,06%, las células madre embrionarias tardías (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) como 0,6 ± 0,1% y las células madre embrionarias maduras (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) como 0,8 ± 0,3% de las células madre embrionarias vivas. La criopreservación con Gibco y el medio de congelación personalizado a -80 ºC durante 7 días redujo el número de células madre embrionarias y células madre embrionarias, sin embargo, esta disminución no fue estadísticamente significativa. Conclusiones: Nuestros datos indican que la criopreservación a -80 °C durante 7 días disminuye, aunque no de manera significativa, la viabilidad de las células madre embrionarias y el número de subconjuntos de células madre embrionarias maduras y células madre embrionarias. Este método puede proporcionar un enfoque optimizado para el aislamiento y la criopreservación a corto plazo de subconjuntos de células madre embrionarias y células madre embrionarias maduras adecuado para ensayos multicéntricos.