Chun-Ting Yuen, Catpagavalli Asokanathan, Alexandra Douglas-Bardsley, Kevin Markey, Peter Rigsby y Dorothy Xing
Las vacunas contra la tos ferina desempeñan un papel esencial en los programas de inmunización en todo el mundo y la prueba de sensibilización a la histamina (HIST) es actualmente la prueba oficial de liberación de lotes para las vacunas combinadas que contienen tos ferina acelular. La HIST, al ser una prueba con animales murinos, presenta grandes problemas de variabilidad de ensayo y cuestiones éticas. Por lo tanto, en respuesta a las 3R, se ha desarrollado un sistema de ensayo bioquímico basado en los dos dominios funcionales de la toxina de la tos ferina (PTx): un protómero A activo enzimáticamente y un oligómero B que se une a los carbohidratos. Se ha demostrado la relevancia clínica de estas dos pruebas bioquímicas en relación con los efectos tóxicos de la PTx. Para evaluar la viabilidad de este sistema de ensayo, también se realizó un estudio colaborativo internacional en el que participaron 9 países sobre la transferibilidad del método y se demostró que este sistema de ensayo podría adoptarse fácilmente en laboratorios de control e instalaciones de fabricación de vacunas. En esta actualización, proporcionamos condiciones de ensayo optimizadas para medir tanto la actividad residual de la ADP-ribosiltransferasa de la PTx como la actividad de unión a los carbohidratos en vacunas específicas. En general, una dilución adecuada de las vacunas ayudaría a aumentar la sensibilidad de la prueba. Los experimentos de adición de componentes mostraron que el ensayo de unión de carbohidratos podía detectar niveles bajos de PTx similares a los de la HIST. Aunque también se pudo demostrar una tendencia positiva con el aumento de la adición de componentes en el ensayo de actividad de la ADP-ribosiltransferasa para algunas vacunas, los valores resultantes en varias vacunas con componentes no fueron estadísticamente significativos y esto se debe a la alta actividad inicial de las vacunas sin componentes. Dado que todos los reactivos de este sistema de ensayo bioquímico están disponibles en todo el mundo, se controlan fácilmente y tienen una buena consistencia de la prueba, ambos ensayos podrían utilizarse para controlar la consistencia del producto. El ensayo de unión de carbohidratos podría incluso considerarse como una alternativa potencial a la HIST para la liberación por lotes de vacunas acelulares contra la tos ferina. Los protocolos para este sistema de ensayo in vitro se suministran como Documentos complementarios 1 y 2.