Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Desarrollo de un ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle colorimétrico para la detección rápida del virus del enrollamiento amarillo de las hojas del tomate

Mohammad Amin Almasi, Mehdi Aghapour Ojaghkandi, Ahmad Hemmatabadi, Fatah Hamidi y Saeedeh Aghaei

El ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) es una técnica novedosa para amplificar ADN a temperatura constante, con alta especificidad, sensibilidad, rapidez y eficiencia. Aplicamos un protocolo de detección rápida, por primera vez, que utiliza amplificación isotérmica mediada por bucle colorimétrico para la detección del virus del enrollamiento amarillo de las hojas del tomate. En este sentido, los cuatro cebadores LAMP (es decir, F3, B3, FIP y BIP), junto con los cebadores PCR (F y R), se diseñaron sobre la base del gen SF de las secuencias de ADN de TYLCV. Si bien los ensayos DAS-ELISA, PCR y LAMP pudieron detectar con éxito muestras infectadas positivas, considerando el tiempo, la seguridad, la sensibilidad, el costo y la simplicidad, el último fue en general superior. Mientras tanto, entre los cinco colorantes visuales diferentes para detectar con precisión los productos LAMP, tanto el azul de hidroxinaftol como GeneFinderTM pudieron producir un cambio de color y un brillo estables y prolongados en un enfoque basado en tubos cerrados para prevenir el riesgo de contaminación cruzada, y finalmente se concluyó que eran los mejores. En general, todos los resultados indicaron que el LAMP ofrece un formato de ensayo novedoso e interesante y conveniente para una
herramienta de diagnóstico rápida, sensible, rentable y bastante fácil de usar para el reconocimiento del virus del rizado amarillo de las hojas del tomate y, por lo tanto, presenta una alternativa a los ensayos basados ​​en PCR.