Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Desarrollo de un método molecular para la detección específica de especies de begomovirus que causan el enrollamiento de las hojas del tomate en Filipinas

Jeremy Roy Augustus I Gómez*

El tomate es uno de los cultivos vegetales más importantes debido a su valor económico y nutricional, pero debido a una enfermedad causada por un Begomovirus , la producción de tomate disminuyó con los años. Los Begomovirus que causan el rizado amarillo de las hojas del tomate o el rizado de las hojas del tomate afectan la producción de tomate en muchas áreas tropicales y subtropicales del mundo. La detección limitada de estos virus de plantas los hizo muy difíciles de detectar y controlar. El estudio tiene como objetivo desarrollar un método basado en moléculas para la detección específica de ToLCPV y ToLCCeV. Esto se hizo: 1) Validando si los cebadores publicados podrían anelaarse a una especie específica de Begomovirus usando alineamiento de secuencias múltiples, 2) Diseñando cebadores para la detección específica de ToLCPV o ToLCCeV y optimizados por PCR, 3) Validando el cebador diseñado para la detección específica de ToLCPV y ToLCCeV usando muestras recolectadas en el campo, 4) Identificar el patrón RFLP usando ADN del genoma de longitud completa in silico . Los cebadores publicados pudieron annealing con cepas ToLCPV y especies ToLCCeV, ToLCMiV y por lo tanto estos cebadores necesitan ser validados en un experimento real para determinar su especificidad. Los cebadores ToLCPV19 y ToLCCeV19 fueron diseñados para detectar específicamente las especies ToLCPV y ToLCCeV respectivamente y la PCR fue optimizada a diferentes temperaturas de annealing: 53℃, 55℃ y 57℃. Se observaron amplicones de ~200 pb en muestras de tomate infectadas con ToLCPV y también muestras de tomate infectadas con ToLCCeV cuando se usaron los cebadores ToLCPV19 y ToLCCeV19. Además, no hubo diferencia en el tamaño de la banda y la intensidad de las bandas a diferentes temperaturas de annealing. La validación de los cebadores diseñados se realizó pero solo con unas pocas muestras de tomate seleccionadas y por lo tanto se debe realizar una validación adicional para determinar la especificidad de los cebadores diseñados. El análisis RFLP mostró que la enzima de restricción EcoRI podía distinguir ToLCPV, ToLCCeV y ToLCMiV ya que producía un número diferente de bandas por especie de Begomovirus .