Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

La duplicación de TBK1 estimula la autofagia en células retinianas derivadas de iPSC de un paciente con glaucoma de tensión normal

Budd A Tucker, Frances Solivan-Timpe, Ben R Roos, Kristin R Anfinson, Alan L Robin, Luke A Wiley, Robert F Mullins y John H Fingert

La duplicación del gen TBK1 causa glaucoma de tensión normal (NTG); sin embargo, el mecanismo por el cual esta variación en el número de copias conduce a la muerte de las células ganglionares de la retina es poco conocido. La capacidad de utilizar células madre pluripotentes inducidas derivadas de la piel (iPSC) para investigar la función o disfunción de un producto génico mutante en tejidos inaccesibles como la retina ahora nos brinda la capacidad de interrogar la fisiopatología de la enfermedad in vitro. Las iPSC se generaron a partir de fibroblastos dérmicos obtenidos de un paciente con NTG asociado a TBK1, mediante la transducción viral de los factores de transcripción OCT4, SOX2, KLF4 y c-MYC. Las células progenitoras de la retina y las neuronas similares a las células ganglionares de la retina posteriores se obtuvieron utilizando nuestro protocolo de diferenciación por pasos desarrollado previamente. La diferenciación a células ganglionares de la retina se demostró mediante rt-PCR dirigida contra TUJ1, MAP2, THY1, NF200 y ATOH7 e inmunohistoquímica dirigida contra NF200 y ATOH7. El análisis de transferencia Western demostró que tanto los fibroblastos como las neuronas ganglionares de la retina derivadas de pacientes con NTG con duplicación del gen TBK1 tienen mayores niveles de proteína LC3-II (un marcador clave de la autofagia). Se ha demostrado previamente que la duplicación de TBK1 aumenta la expresión de TBK1 y aquí demostramos que la misma duplicación conduce a la activación de LC3-II. Esto sugiere que el glaucoma asociado a TBK1 puede ser causado por la desregulación (sobreactivación) de esta vía catabólica.