Pharmaceutica Analytica Acta

Abstracto

Dinámica de la unión de HSP60-Cypd estudiada con resonancia de plasmón superficial

Ekaterina A. Korobkova

Objetivos: La unión de la chaperonina HSP60 a la ciclofilina D (CypD) representa una vía oncogénica que impide que las mitocondrias experimenten la apertura del poro de transición de permeabilidad (PTP). Por lo tanto, la HSP60 puede considerarse un objetivo atractivo para el diseño de inhibidores químicos. La complejidad de la estructura de la HSP60 impide el uso de métodos de detección estándar. El presente estudio tuvo como objetivo analizar la dinámica de las interacciones de CypD con diferentes dominios de la HSP60. Método: Se empleó la tecnología de resonancia plasmónica de superficie (SPR). Los anticuerpos que se asignan a varias regiones de la HSP60 se inmovilizaron en un chip biosensor CM5 utilizando química de acoplamiento de amino. La HSP60 se adhirió a varios anticuerpos en el chip, lo que dio como resultado diferentes orientaciones de la proteína, y se analizó la cinética de su unión a la HSP60. Resultados: Las constantes de velocidad de disociación para las interacciones HSP60-CypD oscilaron entre 5,5 × 10-4 s-1 y 16 × 10-4 s-1. Las constantes de equilibrio de disociación variaron de 15,8 nM a 43,5 nM. Un anticuerpo que reconoce una región entre los residuos 50 y 100 en el dominio ecuatorial de HSP60 impidió su asociación con CypD. Conclusión: La tecnología SPR demostró ser exitosa en el análisis de las interacciones entre CypD y las subunidades HSP60. La fuerza de unión fue comparable a la de una unión anticuerpo-antígeno relativamente fuerte. La unión preferencial de CypD a un dominio específico dentro de la subunidad HSP60 sugiere la posibilidad de diseñar un antagonista molecular.