Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

L-aminoácido oxidasa de Aspergillus fumigatus : purificación y caracterización de la enzima en dos pasos

Susmita Singh, Binod Kumar Gogoi y Rajib Lochan Bezbaruah

La L-aminoácido oxidasa (L-aao) obtenida de Aspergillus fumigatus se purificó mediante cromatografías de intercambio iónico y filtración en gel. El rendimiento de L-aao en la cromatografía de intercambio iónico fue del 24,40 %, mientras que la recuperación de L-aao purificada por filtración en gel fue del 18,70 % de la enzima cruda. La masa molecular de la enzima purificada se estimó en 55 kDa por SDS PAGE y 93 kDa por filtración en gel. La enzima fue estable hasta 40 ºC y en un amplio rango de pH de 5,6 a 9,2. La enzima tiene una mayor especificidad hacia los L-aminoácidos aromáticos hidrofóbicos, a saber, tirosina y fenilalanina. Los parámetros cinéticos, Km y Vmax se determinaron como 43,47 mM y 0,0434 μmol/min/mL respectivamente. El ácido benzoico a 10 mM y el EDTA inhibieron completamente la enzima, mientras que se observó una inhibición mínima con glicina (29,56%) y α-naftol (12,4%). La riboflavina, la azida sódica y la 8-hidroxiquinolina inhiben la enzima hasta un 44,89%, 49,63% y 70,07% respectivamente. El MgSO4 a 10-4 M y 10-3 M aumentó la actividad enzimática en 1,72 y 2,22 veces respectivamente, mientras que el CuSO4 a 10-3 M aumentó la actividad en 1,65 veces. Este es el primer informe de purificación de L-aao de Aspergillus fumigatus.