Tecnología genética

Abstracto

Factores endógenos que provocan daño espontáneo del ADN que conduce a la integración aleatoria en células humanas

Haruna Kamekawa, Aya Kurosawa, Masumi Umehara, Eriko Toyoda y Noritaka Adachi

La integración aleatoria es un fenómeno en el que las moléculas de ADN transfectadas se integran en (sitios aleatorios de) el genoma del huésped a través de una recombinación no homóloga. Aunque se supone que la reparación de las roturas de doble cadena de ADN conduce a eventos de integración aleatoria, no se entiende bien cómo se generan estas lesiones endógenas del ADN en las células vivas. En este estudio, presentamos evidencia de que la topoisomerasa IIa del ADN (Top2α) y las especies reactivas de oxígeno (ROS) son responsables de causar daño al ADN genómico que conduce a la integración aleatoria. Específicamente, empleamos una línea celular de prelinfocitos B humanos para examinar los efectos de los niveles de expresión celular de Top2 y las concentraciones de oxígeno durante el cultivo celular. Descubrimos que el tratamiento de las células con ARNi de Top2α reduce significativamente la frecuencia de integración aleatoria, mientras que la ausencia de Top2β tuvo poco o ningún impacto. También demostramos que las células cultivadas continuamente en condiciones de cultivo con bajo contenido de oxígeno (3 %) después de la electroporación muestran una frecuencia de integración aleatoria reducida en comparación con la de las condiciones normales de oxígeno (21 %). Estos hallazgos respaldan la idea de que la proteína Top2α y las ROS son factores endógenos que pueden producir daño al ADN que conduce a la integración aleatoria del ADN transfectado en células humanas.