Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Evaluación de un medio de cultivo para queratinocitos humanos

Fabiana Regina Xavier Batista, Jussara Rehder y María Beatriz Puzzi

Los queratinocitos humanos son necesarios para la ingeniería tisular de la piel aplicada en la reparación y regeneración de tejidos con vistas a la aplicación clínica. La necesidad de tener altas concentraciones de células en un corto período de tiempo cuando se realiza la proliferación celular es vital. El crecimiento y mantenimiento de estas células implican comúnmente el uso del medio MCDB 153, que se complementa con componentes de origen animal, como factores de crecimiento y suero bovino fetal (FBS). El objetivo de este trabajo fue evaluar diferentes formulaciones basadas en el medio MCDB 153 para la proliferación de queratinocitos. Para ello, se realizaron varios experimentos para definir qué suplementos son importantes para el cultivo de células de la piel utilizando un diseño factorial de 24. Se obtuvieron muestras de piel de cuatro pacientes que dieron su consentimiento y se sometieron a una dermolipectomía, la operación de cirugía plástica. Estos fragmentos se trataron con tripsina-EDTA al 0,25% durante cuatro horas, a 37ºC. Además, se separó la epidermis de la dermis, proporcionando células de la piel. Los cultivos en lotes se realizaron en placas de 6 y 96 pocillos, además de matraces de 25 cm2. Los resultados sobre el crecimiento y metabolismo celular mostraron que los queratinocitos crecieron completamente en medio MCDB 153 que contenía insulina (7,5 µg.mL-1), extracto de hipófisis bovina-BPE (80 µg.mL-1), factor de crecimiento epidérmico-EGF (0,08 µg.mL-1), hidrocortisona (0,63 µg.mL-1) y glutamina (1 gL-1). Por otro lado, los medios de cultivo propuestos en el diseño experimental no dieron como resultado un crecimiento celular satisfactorio. Además, aunque la concentración inicial de glucosa fue baja en la mayoría de los casos, el lactato fue producido en gran medida por las células alcanzando 1 gL-1.