Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Expresión y purificación del interferón alfa humano fusionado a SAK en Escherichia coli

Shardul Salunkhe, Bhaskarjyoti Prasad, Ketaki Sabnis-Prasad, Anjali Apte-Deshpande y Sriram Padmanabhan

Se describe un método para mejorar el replegamiento y la purificación del interferón -α humano derivado de E. coli (rhIFN β2b) a partir de cuerpos de inclusión como proteína de fusión de estafiloquinasa (SAK). Dicha proteína de fusión no requirió la suplementación de codones raros para la expresión y se encontró que era estable a 37 °C. Las condiciones óptimas de replegamiento implicaron el uso de un agente desnaturalizante suave sin la necesidad de ningún otro agente para prevenir la agregación. La proteína de fusión SAKrhIFN β2b se purificó con éxito utilizando dos pasos de purificación y se escindió utilizando enteroquinasa en dos fragmentos, a saber, SAK e IFN. Se encontró que ambas proteínas eran biológicamente activas mostrando un plegamiento adecuado de ambos socios de fusión. El IFN escindido mostró un tiempo de retención similar en RP-HPLC que el IFN purificado no marcado derivado de bacterias, así como un peso molecular similar en el Bioanalizador Agilent 2100, lo que indica el procesamiento correcto del IFN después de la escisión con enteroquinasa. Se encontró que los niveles de expresión de SAK-IFN eran dos veces mayores que los observados con IFN no marcado en condiciones experimentales similares.