Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Expresión de una secuencia de papaína de Carica papaya optimizada por codones en la levadura metilotrófica Pichia pastoris

Nicole Werner, Thomas Hirth, Steffen Rupp y Susanne Zibek

La papaína, endoproteasa de cisteína, es una de las proteasas vegetales más utilizadas en aplicaciones industriales. Sin embargo, el aislamiento tradicional de la papaína a partir del látex de las plantas de papaya no puede cubrir la demanda mundial. Para aumentar la producción de papaína para aplicaciones industriales, en los últimos años se han estudiado varios sistemas de expresión para su producción recombinante. Mientras que la expresión en Eschericha coli dio lugar a la acumulación de proteína insoluble, la expresión en el sistema baculovirus/insecto y en Saccharomyes cerevisiae dio lugar a bajos rendimientos de proteína soluble inadecuados para la producción a gran escala. Aquí describimos la expresión heteróloga de una secuencia de propapaína sintética optimizada por codones en las cepas X33 (Mut+) y KM71H (Muts) de Pichia pastoris. La propapaína recombinante podría expresarse como proteína soluble y secretarse en el medio de cultivo a través del péptido señal del factor α. Las actividades más altas se obtuvieron en la cepa Muts cuando se cultivó en un medio complejo. Después de la purificación por cromatografía de Ni-NTA, se obtuvieron 463 mg/L de propapaína recombinante, comparable a los rendimientos de propapaína más altos informados hasta ahora en E. coli después de la solubilización y el plegamiento de proteínas y con una actividad específica similar a una papaína comercial del látex de papaya.