Biología unicelular

Abstracto

Expresión génica en células individuales aisladas de la línea celular de cáncer de próstata CWR-R1 y tejido de próstata humano en función del fenotipo de población secundaria

Kalyan J Gangavarapu, Austin Miller y Wendy J Huss

La definición de señales biológicas a nivel de células individuales puede identificar mutaciones desencadenantes del cáncer. Las técnicas para aislar células individuales, como la clasificación por microfluidos y los sistemas de captura magnética, tienen limitaciones como: alto costo, trabajo intenso y el requisito de una gran cantidad de células. Por lo tanto, el objetivo de nuestro estudio actual es identificar una técnica rentable y de mano de obra, confiable y reproducible que permita el aislamiento de células individuales para su análisis a fin de promover el uso regular en el laboratorio, incluida la PCR de transcripción inversa estándar (RT-PCR).

En el presente estudio, utilizamos células de próstata individuales aisladas de la línea celular de cáncer de próstata CWR-R1 y muestras clínicas de próstata humana, según el eflujo del transportador de casete de unión a ATP (ABC) del ciclo del tinte violeta (DCV), ensayo de población lateral. Se determinó la expresión de cuatro genes: ABCG2; Aldehído deshidrogenasa 1A1 (ALDH1A1); receptor de andrógenos (AR); y marcador de células madre embrionarias, Oct-4.

Los resultados del estudio actual en la línea celular CWR-R1 mostraron la expresión de los genes ABCG2 y ALDH1A1 en el 67 % de las células de población de un solo lado y en el 17 % o el 100 % de las células de población no lateral respectivamente. Los estudios que utilizaron células individuales aisladas de muestras clínicas mostraron que el gen Oct-4 se detecta en solo el 22 % de las células de población de un solo lado y en el 78 % de las células de población no lateral única. Mientras que la expresión del gen AR está en el 100 % de las células de población de un solo lado y de población no lateral aisladas de la misma muestra clínica de próstata humana.

Estos estudios demuestran que la realización de RT-PCR en células individuales aisladas mediante FACS puede realizarse con éxito para determinar la expresión génica en células individuales de líneas celulares y tejido digerido enzimáticamente. Si bien estos estudios proporcionan una lectura simple de expresión de sí/no, la RT-PCR cuantitativa más sensible podría proporcionar incluso más información si fuera necesario.