J. Alex Pasternak, Siew Hon Ng, Tobias Käser, François Meurens y Heather L. Wilson
Las células mononucleares derivadas de sangre periférica de cerdo (PBMC) y las células mononucleares de la lámina propia (LPMC) estimuladas con mitógenos ex vivo pueden mostrar una variación significativa de animal a animal, lo que dificulta la interpretación de las respuestas en una especie animal exógama. Las poblaciones de células mixtas se estimularon ex vivo con 2,5 μg/ml de Con A o 2,5 ng/ml de PMA más 250 ng/ml de ionomicina (PMAi; (LPCM solamente)) o medio solo durante 72 horas. Luego, los sobrenadantes se analizaron para la producción de citocinas utilizando un ensayo Bioplex para IFNα, IFNγ, IL-10 e IL-12 porcinos. Las PBMC no estimuladas tenían niveles significativos de IL-10 y el valor medio para este grupo disminuyó en presencia de Con A. Sin embargo, Con A indujo la producción de IFNα e IFNγ, pero no de IL-12 en esta población celular. Por el contrario, las LPMC no estimuladas y estimuladas con Con A produjeron IL-10, IFNα, IFNγ insignificantes, y la mayoría de las LPMC de los animales mostraron una producción insignificante de IL-12 en respuesta a Con A. Por el contrario, las LPMC estimuladas con PMAi produjeron IFNγ, lo que sugiere que la producción de citocinas es una respuesta específica del mitógeno. Cuando rastreamos las respuestas específicas de los animales, observamos que subconjuntos discretos de las PBMC de los animales respondieron a Con A con una producción significativamente mayor o menor de IL-10 en relación con las células no estimuladas. Además, en las LPMC, algunas células no produjeron IL-12 en respuesta a Con A, pero mostraron una producción aumentada en respuesta a PMAi, mientras que otras mostraron producción de IL-12 en respuesta a Con A, pero ninguna respuesta a PMAi. El análisis de citometría de flujo mostró que las PBMC eran una mezcla de células T CD3+ > células B CD21+ > células mieloides CD172+, mientras que las LPMC estaban compuestas principalmente por células T citotóxicas y células Natural Killer. El porcentaje de células T CD8α+CD4+ con experiencia en antígenos fue mayor en las LPMC en relación con las PBMC. Como se esperaba en una especie exógama, existen diferencias específicas de cada animal en la producción de citocinas en respuesta a los estimulantes y pueden confundir la interpretación de los resultados a menos que se realice un seguimiento individual.