Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Ensayos mejorados para identificar los efectos de los antibióticos en bacterias planctónicas y sésiles utilizando el ejemplo del 1,8-cineol

Brotzmann V, Schuermann M, Kaltschmidt B, Kaltschmidt C y Sudhoff H

La detección de sustancias antibióticas es un paso obligatorio durante el desarrollo de fármacos. Existen diversos métodos para comprobar su eficacia, que pueden dividirse en métodos de difusión y dilución. Los métodos de difusión en medios a base de agar son enfoques más bien cualitativos, mientras que los métodos de dilución, que se ejecutan habitualmente en placas de microtitulación de poliestireno, se utilizan con frecuencia para determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración inhibitoria mínima de biopelícula (CIM50) de forma cuantitativa. Durante estos ensayos estandarizados, a menudo se descuidan las propiedades físicas del agente, por ejemplo, sus propiedades hidrófobas y su inestabilidad térmica. Este estudio compara diferentes ensayos de difusión para determinar su sensibilidad y ensayos de dilución mejorados con respecto a la sensibilidad térmica y el carácter hidrófobo de los antibióticos. Aplicamos 1,8-cineol, un componente antibacteriano hidrófobo de los aceites esenciales, al patógeno Staphylococcus aureus e investigamos la influencia del tiempo de incubación, los recipientes de cultivo celular y los surfactantes comúnmente empleados en el ensayo. El estudio presentado describe un ensayo de difusión optimizado y un protocolo para la determinación exacta de la CMI y la CMI50 de sustancias antibióticas hidrofóbicas térmicamente inestables. Nuestros ensayos se pueden ejecutar fácilmente ya que se basan en mediciones de densidad óptica y tinción simple con violeta de cristal. Concluimos que se pueden realizar pruebas preliminares de sustancias hidrofóbicas mediante el método de difusión de pozo. Sin embargo, para la determinación de la CMI y la CMI50 recomendamos encarecidamente la aplicación de tubos de vidrio limpios y grabados en lugar de placas de cultivo celular de poliestireno. El uso de los surfactantes Tween 80 o Tween 20 se consideró innecesario y, además, falsificaba los resultados. En conjunto, nuestras técnicas estándar mejoradas pueden ayudar a cuantificar mejor el potencial antimicrobiano de los antibióticos hidrofóbicos, por ejemplo, los aceites esenciales. Esto puede brindar nuevos conocimientos sobre el modo de acción y, además, permitir el desarrollo de nuevas sustancias antimicrobianas que se necesitan con urgencia para combatir las resistencias a los antibióticos comunes.