Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Mantenimiento in vitro de la mucosa olfatoria: con células envolventes olfatorias enriquecidas

Neetu Singh, Saroj C Gopal, Rajeshwar N Srivastava, Tulika Chandra, Satya P Agarwal, Sanjay K Singh, Devendra K Gupta y Anil K Balapure

La mucosa olfatoria humana (OM) regula el olfato a través de la regeneración axonal y la mielinización mediada por células madre y células envolventes olfatorias (OEC) residentes en el nicho. Las OEC purificadas/biopsias olfativas se han utilizado para la recuperación funcional en diferentes modelos de lesión de la médula espinal (LME). Sin embargo, informes recientes consideran que esto es discutible, donde proponemos un cultivo primario de OM, células basales del epitelio olfatorio y células madre ectomesenquimales olfatorias. Nuestras condiciones de cultivo definidas mejoran la vida útil de la OM con el enriquecimiento de OEC que proporciona una estrategia para el empleo en la reparación de la LME/daño coclear. Brevemente, la OM después de la recolección, se cortó de forma no enzimática, se cultivó durante 6 semanas y las células se caracterizaron morfológicamente, inmunocitoquímicamente y mediante transferencia Western. Para el día 21, ~70% de las células OEC con forma de astrocito y aplanadas en forma de láminas teñidas con GFAP y p75NTR mostraron remielinización axonal. Para el día 30, se encontró una masa densa y superpuesta de células con caspasa 3, 8, 9 (producto génico y actividad), fosfo-p53 negativa; GFAP y p75NTR positivas. Esto estuvo acompañado de cambios degenerativos a las 6 semanas mediante tinción con GFAP. Por el contrario, la tripsinación el día 21 resultó en >95% de células OEC con morfología aplanada, positividad para GFAP y p75NTR. Las células OEC derivadas de humanos se compararon con las células del bulbo olfatorio de rata SD de 2 días cultivadas durante 2 semanas en medio F12 (GFAP y p75NTR positivas). Por lo tanto, la mucosa olfativa cultivada que muestra regeneración axonal con células OEC en cultivo proporciona un vehículo para estudios de reparación de daño coclear/LME.