Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Aislamiento, purificación parcial y caracterización de la L-asparaginasa del suero de erizo

Ekpa Emmanuel, Nzelibe HC y Onyike E

La necesidad de explorar más a fondo otras fuentes de terapia para las leucemias impulsó este trabajo actual. Ya se sabe que la L-asparaginasa posee un gran potencial en el tratamiento de cánceres de glóbulos blancos, pero las fuentes de esta enzima y sus propiedades determinan la eficacia de este fármaco. En general, para que la asparaginasa sea ideal para su uso en terapia antitumoral, debe satisfacer una variedad de criterios. El organismo que se selecciona debe producir la asparaginasa en gran cantidad o rendimiento, y debe ser capaz de ser aislada de fuentes mamíferas simples. Los procedimientos desarrollados para la purificación de la enzima deben ser lo más rápidos y simplificados posible. La enzima purificada debe tener estabilidad a largo plazo en almacenamiento, actividad máxima a un pH fisiológico y una Km para el sustrato por debajo de la concentración del sustrato en la sangre. Por lo tanto, el objetivo de esta presente investigación fue purificar parcialmente y caracterizar esta enzima del suero de Hedgehog para comparar sus potenciales antileucémicos con los de la literatura documentada para una posible aplicación médica futura. La L-asparaginasa se aisló y se purificó parcialmente a partir del suero de Hedgehog, que también se sabe que es un reservorio de muchas otras proteínas útiles, incluidos los antivenenos, utilizando un perfil de cuatro pasos de fraccionamiento con sulfato de amonio, diálisis y cromatografía de intercambio iónico y filtración en gel. La enzima dio un rendimiento general del 77,58 %, pH y temperatura óptimos de 7,8 y 39 ºC respectivamente, y una Km de 0,0125 mM. La filtración en gel dio un peso molecular aproximado de 139 000 Da, mientras que la SDS PAGE indicó un peso molecular de subunidad de 36 000 y 34 600 Da respectivamente. La enzima también cataliza la hidrólisis de glutamina, aunque ligeramente. Mg2+ y Zn2+ sirven como activadores de la L-asparaginasa del suero de Hedgehog, mientras que también se observó inhibición de iones pesados ​​como Hg2+. Este trabajo demuestra que las fuentes mamíferas de esta enzima podrían ser más preferibles para el tratamiento de tumores dependientes de asparagina en el futuro.