Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Pruebas de mutagénesis insercional basadas en LINE-1 para identificar genes involucrados en la diferenciación de células madre embrionarias

Sung-Hun Lee y Danny Rangasamy

Antecedentes: El conocimiento de las propiedades intrínsecas de las células madre embrionarias es esencial antes de que la posibilidad de utilizar estas células con fines terapéuticos se convierta en una realidad. Las pruebas de mutagénesis insercional se utilizan ampliamente para identificar genes suficientes para conferir un fenotipo particular; sin embargo, las aplicaciones de tales enfoques se limitan a los modelos de ratón. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar un nuevo sistema de transposón de ADN que permita enfoques de descubrimiento de genes en células madre.
Métodos: Este estudio se realizó para explorar la posibilidad de utilizar el retrotransposón del elemento nuclear 1 intercalado largo (LINE -1) como un vector de captura de genes para identificar genes involucrados en el mantenimiento y la diferenciación de células madre embrionarias de ratón.
Resultados: Desarrollamos un sistema de retrotransposón LINE-1 episomal, no viral, utilizando las regiones de unión de la matriz/estructura en la estructura principal de nuestro vector. Este vector de captura de genes alberga un marcador GFP cuya expresión ocurre solo después de una mutagénesis insercional exitosa. Al utilizar este vector, junto con la expresión de GFP, hemos aislado con éxito cuatro clones de células madre embrionarias individuales que muestran genes alterados, incluidos dos genes conocidos. Luego confirmamos la identidad de estos genes utilizando un enfoque de PCR inversa y verificamos su función en la diferenciación celular utilizando shRNAs y marcadores indiferenciados de células madre embrionarias .
Conclusiones: La facilidad de uso de este mutágeno insercional y la simplicidad de identificar las células con genes alterados por la expresión de GFP hacen de este vector LINE-1 una herramienta prometedora para el descubrimiento de genes de células madre embrionarias y células madre cancerosas .