Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Método colorimétrico de D-aminoácido oxidasa de rendimiento medio/alto para la determinación de D-aminoácidos. Aplicación para las racemasas de aminoácidos

Armand Berneman, Marcelo Alves-Ferreira, Nicolas Coatnoan, Nathalie Chamond y Paola Minoprio

La detección y cuantificación de aminoácidos libres en muestras aún requiere tecnologías elaboradas, potentes y, por lo general, de alto costo y, a veces, que requieren mucho tiempo, como la cromatografía de gases, la HPLC o técnicas de cambio de columna altamente selectivas y sensibles. En este trabajo, nos propusimos desarrollar un método simple, de un solo paso, en placa de microtitulación para detectar y/o cuantificar la mayoría de los D-aminoácidos en soluciones, basado en la enzima D-aminoácido oxidasa y la generación de cantidades estequiométricas de peróxido de hidrógeno. La inclusión de peroxidasa de rábano picante y OPD permite la determinación de la concentración de D-aminoácidos a través de la absorbancia de los productos de reacción en comparación con diluciones seriadas de cantidades equimolares de estándares de aminoácidos L/D. La metodología se adapta fácilmente para un análisis de rendimiento medio/alto de las actividades de la racemasa de aminoácidos.