Revista de Ingeniería Química Avanzada

Abstracto

Reactor microfluídico para la operación secuencial de la reacción en cadena de la polimerasa/reacción de detección de ligasa

Masahiko Hashimoto, Kazuhiko Tsukagoshi y Steven A. Soper

Hemos desarrollado un biorreactor microfluídico para detectar mutaciones de una sola base en el ADN genómico, donde se llevaron a cabo en secuencia una reacción en cadena de la polimerasa primaria (PCR) y una reacción de detección de ligación aleloespecífica (LDR). Se investigó exhaustivamente el efecto del arrastre de la PCR primaria en la LDR posterior en términos de rendimiento y fidelidad de la LDR, y descubrimos que no era necesariamente necesario un tratamiento post-PCR para los amplicones antes de su incorporación a la fase LDR, lo que nos permitió utilizar un mezclador difusivo simple para mezclar en línea la solución post-PCR con los reactivos LDR. También realizamos un análisis numérico para estimar aproximadamente la longitud del canal necesaria para la mezcla difusiva. Demostramos con éxito la capacidad del sistema para detectar un ADN mutante en 1000 secuencias normales a una velocidad de procesamiento relativamente alta (tiempo de procesamiento total = ca. 28,1 min).