Bioquímica clínica y médica

Abstracto

Análisis molecular de la metilación del gen RASSF1 y la expresión del ARNm en el cáncer de mama esporádico

Maria Lagiou, Nikoleta Poumpouridou, Nikolaos Goutas, Dimitrios Vlachodimitropoulos, Aggeliki Pappa, Evi Lianidou, Triantafyllos Liloglou y Christos Kroupis

Introducción: El objetivo de este estudio fue validar métodos innovadores y confiables para estudiar la metilación del ADN del primer promotor del gen RASSF1 (desde donde se transcribe su transcripción primaria RASSF1A en el tejido mamario), su expresión de ARNm y su evaluación en cáncer de mama esporádico. Materiales y métodos: Se analizaron el ADN y el ARN de 81 tejidos de cáncer de mama congelados con datos histopatológicos conocidos, así como 4 tejidos mamarios normales. Los niveles de metilación del ADN se evaluaron mediante pirosecuenciación, analizando 9 dinucleótidos CpG en la isla CpG del primer promotor de RASSF1. Para la expresión de ARNm, se utilizó un método RT-qPCR en tiempo real y se validó con estándares sintéticos, con el kit SYBR Green PCR y un conjunto adecuado de cebadores estandarizados (Qiagen) para todas las variantes de transcripción de RASSF1 (excepto G). Para la cuantificación relativa de la expresión de RASSF1, se utilizó el método 2-ΔCt con beta2-microglobulina como gen de referencia. Resultados: 59 muestras fueron caracterizadas como RASSF1 normalmente metilado (72,8%), mientras que 22 muestras como hipermetilado (27,2%). Además, 40 muestras fueron clasificadas como sobreexpresoras de ARNm de RASSF1 (49,4%), mientras que 41 (50,6%) como subexpresoras. No se encontró correlación inversa entre la metilación y la expresión de RASSF1 (p=0,207). La regresión logística mostró que la probabilidad de infiltración ganglionar aumentaba con la presencia de receptores ER negativos (p=0,008, OR 0,09, IC 0,14-0,52), el porcentaje de metilación (p=0,006, OR 7,96, IC 1,82-34,86) y el nivel de expresión de RASSF1 (p=0,047, OR 3,94, IC 1,02-15,29). El análisis de supervivencia mostró que existe una correlación estadísticamente significativa marginal entre la metástasis y la sobreexpresión del ARNm RASSF1 (prueba de log rank, p=0,040). Conclusiones: Los ensayos evaluados parecen proporcionar información potencialmente útil para el manejo clínico de los carcinomas de mama. En el futuro se debería evaluar un ensayo confiable similar para la metilación del segundo promotor RASSF1. Con respecto al estudio de expresión, una nueva estrategia de diseño con sondas específicas para todos los diferentes transcritos de RASSF1, proporcionaría poder adicional en el estudio y potenciaría el uso de nuevos biomarcadores RASSF1 en la evaluación clínica del cáncer de mama esporádico.