Revista de Petróleo y Biotecnología Ambiental

Abstracto

Clonación molecular y expresión de genes de celulasa y poligalacturonasa en E. coli como una aplicación prometedora para la producción de biocombustibles

Eman Ibrahim, Kim D. Jones, Ebtesam N. Hossenya

0La biomasa lignocelulósica tiene potencial para el bioetanol, un combustible renovable. Una limitación es que la bioconversión del material lignocelulósico complejo a azúcares simples y luego a bioetanol es un proceso desafiante. Trabajos recientes se han centrado en la ingeniería genética de un biocatalizador que puede desempeñar un papel crítico en la producción de biocombustibles. Escherichia coli ha sido considerada un huésped conveniente para biocatalizadores en la producción de biocombustibles por su fermentación de glucosa en una amplia gama de alcoholes de cadena corta y producción de hidrocarburos altamente desoxigenados. La bacteria Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (P. carotovorum) es conocida por su maceración de la pared celular de la planta causando podredumbre blanda. La capacidad de destruir plantas se debe a la expresión y secreción de una amplia gama de enzimas hidrolíticas que incluyen celulasas y poligalacturonasas. P. carotovorum ATCC™ no. Se utilizó 15359 como fuente de ADN para la amplificación de celB, celC y peh. Estos genes codifican 2 celulasas y una poligalacturonasa, respectivamente. Los cebadores se diseñaron en base a secuencias genéticas publicadas y se utilizaron para amplificar los marcos de lectura abiertos del ADN genómico de P. carotovorum. Los productos de PCR individuales se clonaron en el vector de expresión pTAC-MAT-2 y se transformaron en Escherichia coli. Las secuencias de aminoácidos deducidas de los genes clonados se analizaron para sus dominios catalíticamente activos. La estimación de los pesos moleculares de las proteínas expresadas se realizó mediante análisis SDS-PAGE y los productos celB, celC y peh fueron aproximadamente 29,5 kDa, 40 kDa y 41,5 kDa, respectivamente. La determinación cualitativa de las actividades de celulasa y poligalacturonasa de los genes clonados se llevó a cabo mediante ensayos de difusión en agar.