Tecnología genética

Abstracto

Detección molecular y expresión de azurina: una proteína anticancerígena a partir de aislados locales de especies de Pseudomonas

Aslam F, Farooq A, Qaiser H, Bajwa S, Saleem F y Naz S

La azurina fue reconocida como un fármaco anticancerígeno en el año 2000 y desempeña un papel importante en la inducción de la apoptosis y la citotoxicidad. La azurina puede incorporarse al citosol y al material nuclear después de penetrar en las células tumorales y estabilizar la p53 (una proteína supresora de tumores) que facilita el aumento de su nivel dentro de la célula. Se clonó un fragmento de azurina de 447 pb amplificado por PCR de Pseudomonas aeruginosa en el vector de clonación pTG19-T. La secuencia de ADN predice una preproteína con un péptido señal de 19 aminoácidos seguido de una proteína azurina madura de 128 aminoácidos. El gen de la azurina se clonó en el vector pET22b. El vector recombinante rpET22b (+)-Azu se clonó en células BL21-Codon Plus (DE3). Se obtuvo una expresión optimizada y alta del gen de la azurina a una concentración de 0,5 mM de IPTG después de 6 horas a 37 °C. La secuenciación muestra una homología de secuencia del 99,8 % con la secuencia de azurina informada. Se detecta una mutación silenciosa, es decir, de CCA a CCG, en el aminoácido 17. Sin embargo, el aminoácido resultante (prolina) sigue siendo el mismo.